O Trem do Pantanal vai operar no trecho Campo Grande (km 840,714) a Corumbá (km 1.300,292), totalizando 459,578 km. De acordo com a Resolução 509/04 publicada no DOU de 06/05/04 o início da operação do trem turístico só ocorrerá após a conclusão das obras e melhorias na via permanente para adequação ao transporte ferroviário de passageiros, bem como a apresentação da relação do material rodante, acompanhada de laudo técnico idôneo comprovando o atendimento às condições de segurança e a inspeção técnica e operacional a ser realizada pela ANTT, para verificação das condições operacionais e de segurança permanente.